細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)是標(biāo)記免疫技術(shù)發(fā)展較早的一種，它可以觀察組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位，以及一些特殊信號(hào)分子蛋白的出核/入核的定位變化。在這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞培養(yǎng)板是一種關(guān)鍵性的耗材。其實(shí)驗(yàn)步驟如下：
第一天：
1. 在細(xì)胞培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；
2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；
3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室溫通透20min（細(xì)胞膜上表達(dá)的抗原省略此步驟）；
4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水紙吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30min；
5. 吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜；
第二天：
6. 加熒光二抗：PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：從加熒光二抗起,后面所有操作步驟都盡量在較暗處進(jìn)行。
7. 復(fù)染核：滴加DAPI避光孵育5min，對標(biāo)本進(jìn)行染核,PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；
8. 用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。
細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)
以上是細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)的具體步驟，用于這種實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)板一般都要經(jīng)過特殊的TC處理，以滿足細(xì)胞的貼壁需求。此外還要注意，接種細(xì)胞時(shí)要輕柔混勻，防止細(xì)胞局部生長過密，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
