溶源性細(xì)菌是指染色體上整合有前噬菌體并能正常生長(zhǎng)繁殖而不被裂解的細(xì)菌，溫和噬菌體已被廣泛用于轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因工程載體和分子生命科學(xué)等領(lǐng)域。利用細(xì)胞培養(yǎng)瓶可對(duì)細(xì)菌進(jìn)行溶源性檢查，具體操作方法如下：
T225細(xì)胞培養(yǎng)瓶
1.溶源菌培養(yǎng)：將經(jīng)LB斜面活化的大腸桿菌225（λ），接種于裝有20mlLB培養(yǎng)液的250ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，30℃振蕩培養(yǎng)16h，再?gòu)闹腥?ml菌懸液接入另裝有20ml LB培養(yǎng)液的250ml三角瓶?jī)?nèi)，37℃振蕩培養(yǎng)2h至對(duì)數(shù)期。
2．排除游離噬菌體：如待檢菌株為芽孢桿菌，可先制成孢子懸液，再經(jīng)80℃ 10min處理，殺死溶源菌表面可能吸附的及游離的噬菌體；如待檢菌抹為非芽孢桿菌，可利用噬菌體制備的抗血清或0.2%檸檬酸鈉溶液洗滌對(duì)數(shù)期溶源菌細(xì)胞，除去表面吸附的及游離的噬菌體。然后經(jīng)4000r/min離心10min，上清液可加人敏感指示菌做雙層平板測(cè)定，用于檢驗(yàn)樣品屮足孖釕游離的噬菌體及吸附「溶源菌表曲的噬菌體，離心后的菌體細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)處理。
T175細(xì)胞培養(yǎng)瓶
3.誘導(dǎo)溶源菌：離心后收集的菌體用無(wú)菌生理鹽水洗滌兩次，用生理鹽水或100mmol/l Tris-HCL緩沖液（pH7.0）制成終濃度為1011個(gè)/ml細(xì)胞的菌懸液，每皿加5ml菌懸液，經(jīng)紫外燈30W，距離30cm、照射30s，立即加入5ml雙倍濃度的LB培養(yǎng)液，混勻后37℃黑暗中培養(yǎng)2h。
4.溶源性菌株檢查：按雙層瓊脂法操作，取上述誘導(dǎo)裂解液加入幾滴氯仿，以10倍稀釋法適當(dāng)稀釋，選擇后3個(gè)稀釋度的稀釋液，毎個(gè)稀釋液取0.3ml與0.2ml對(duì)數(shù)期敏感大腸桿菌226菌懸液混勻，再加入融化后冷卻至45℃的LB半體培養(yǎng)基，立即混勻，隨即傾入LB固體培養(yǎng)基平板上，待凝固后，37℃培養(yǎng)6h觀察。經(jīng)過(guò)培養(yǎng)的平板如果有大量噬菌斑出現(xiàn)就證明被檢菌株是溶源菌。
檢查細(xì)菌是否具有溶源性可按照以上步驟進(jìn)行操作，操作時(shí)注意過(guò)程中的無(wú)菌性，避免因操作不當(dāng)影響檢測(cè)結(jié)果。
