我們在使用細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞時總會遇到一些特殊情況而養(yǎng)不好細(xì)胞,今天富道細(xì)胞就來跟大家分享一下細(xì)胞培養(yǎng)瓶中細(xì)胞生長緩慢應(yīng)該怎么辦。
接種量太少。細(xì)胞長得太滿會有接觸抑制,而細(xì)胞接種濃度低,也會使細(xì)胞生長繁殖較慢。一般情況下,細(xì)胞長至80-90%可進(jìn)行傳代,當(dāng)細(xì)胞長得不太滿時進(jìn)行了傳代,會使得細(xì)胞接種濃度太低,可能導(dǎo)致細(xì)胞自分泌的物質(zhì)濃度減少,造成生細(xì)胞生長緩慢。
因此適宜的接種密度,可以促使細(xì)胞增殖,接種密度太低或太高都不利于細(xì)胞的生長增殖。
培養(yǎng)液中細(xì)胞生長所需的必須成分耗盡。培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)耗盡,細(xì)胞就會生長緩慢,所以需要定時更換培養(yǎng)液,以保證細(xì)胞生長。
如果復(fù)蘇出來的細(xì)胞量不是很多,我會在第二天進(jìn)行換液。一些細(xì)胞生長緩慢,生長周期長,也需要定時更換培養(yǎng)液。
培養(yǎng)液中一般都添加了酚紅,在培養(yǎng)基中被用來作為PH值指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。開始時,培養(yǎng)基為粉紅色,在細(xì)胞生長過程中會產(chǎn)生乳酸和二氧化碳,導(dǎo)致培養(yǎng)液顏色變黃,不利于細(xì)胞生長。當(dāng)觀察到培養(yǎng)液變黃,基本可以進(jìn)行換液培養(yǎng)。
培養(yǎng)試劑保存不當(dāng)。
血清需保存在-20℃環(huán)境中,在4℃保存不超過一個月。培養(yǎng)液放于4℃環(huán)境中,盡快用完。培養(yǎng)液失效或質(zhì)量不好,會影響細(xì)胞的生長。當(dāng)然,這種情況比較少,培養(yǎng)液一般現(xiàn)配現(xiàn)用。如果發(fā)現(xiàn)是培養(yǎng)液質(zhì)量不好,那就換一個牌子的培養(yǎng)液吧。
細(xì)胞老化。
當(dāng)細(xì)胞傳了很多代后,細(xì)胞出現(xiàn)形態(tài)活性不好的現(xiàn)象,可能是細(xì)胞老化。癌細(xì)胞可能影響不大(我們實驗室的癌細(xì)胞一般傳至15代活性會降低),正常人體細(xì)胞的傳代次數(shù)有限有的細(xì)胞只用到第三代就不用了,所以這個情況因細(xì)胞而異吧。