我們在使用細(xì)胞工廠時對生長到一定程度的細(xì)胞就到了收獲的時候了,這時候就需要借助胰酶對細(xì)胞工廠上的細(xì)胞進(jìn)行消化后再收獲一般使用trypsin-EDTA 濃度為 0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na 或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。
首先我們先介紹一下胰酶:胰酶儲存的環(huán)境一般在–20°C左右,我們在解凍胰酶的普遍是在 4°C 的環(huán)境中進(jìn)行,我們在第一次開瓶后應(yīng)立即將胰酶少量分裝于無菌試管中,并保存于 –20°C環(huán)境中,這種操作是將反復(fù)冷凍解凍造成 trypsin 之活性降低的影響減少,而且這樣的操作流程也會降低污染的可能。
而我們在細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時胰酶配制也是很重要的一件事濃度過高時,是很容易造成我們細(xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多、一些黑渣子的增多,所以我們在常規(guī)細(xì)胞傳代時建議用 0.05% 的胰酶進(jìn)行消化,對于難消化的細(xì)胞可采用 0.25% 胰酶進(jìn)行消化,而細(xì)胞工廠的細(xì)胞密度過高超過 80% 時,我們可以采用分步消化法。而溶度過低時消化不足則細(xì)胞難以從瓶壁上吹下,反復(fù)吹打則會損傷細(xì)胞活性。因此,控制胰酶消化時間尤為重要。
當(dāng)然我們在使用細(xì)胞工廠或其他細(xì)胞培養(yǎng)耗材時不同細(xì)胞對胰酶消化液的敏感性不同,細(xì)胞對胰酶消化的時間也會有差異。對于新購買的細(xì)胞,富道細(xì)胞建議我們先用低濃度的胰酶仔細(xì)去摸索一下消化時間,可每隔 1 分鐘鏡下觀察細(xì)胞是否變圓,記錄最佳消化時間,下一次操作時參考之前的記錄來控制時間即可。
這就是富道細(xì)胞對細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時胰酶配制時的一些說明,希望可以對各位細(xì)胞培養(yǎng)的時候能起到一定的幫助。