細(xì)胞培養(yǎng)瓶是一種方形的細(xì)胞培養(yǎng)容器,一般用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)我們需要掌握細(xì)胞的狀態(tài),以確定細(xì)胞培養(yǎng)的效果如何,細(xì)胞活力是一項(xiàng)重要指標(biāo)。
在細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞,總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力。通常我們會(huì)通過(guò)以下幾種方法進(jìn)行檢測(cè):
1、染色排除法,也是比較常用的方法。
(1)臺(tái)盼藍(lán)法:死細(xì)胞染成藍(lán)色,活細(xì)胞不著色;
(2)苯胺黑法:死細(xì)胞染成黑色,活細(xì)胞不著色;
(3)伊紅Y法:光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞核呈藍(lán)黑色,胞漿呈淡紅色。凋亡細(xì)胞在組織中單個(gè)散在分布,核染色質(zhì)致密濃縮,核固縮,核破碎,形成凋亡小體等。
2、熒光排除法:生活力強(qiáng)的細(xì)胞能發(fā)出強(qiáng)烈的黃綠色熒光;生活力弱的細(xì)胞發(fā)出熒光也較弱;死亡細(xì)胞無(wú)熒光。
3、細(xì)胞內(nèi)酶與特定試劑的顯色反應(yīng):
(1)MTT比色實(shí)驗(yàn):琥珀酸脫氫酶可使MTT分解產(chǎn)生蘭色結(jié)晶狀甲贊顆粒積于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞周?chē)淞颗c細(xì)胞數(shù)呈正比,也與細(xì)胞活力呈正比
(2)克隆形成試驗(yàn):測(cè)定單個(gè)細(xì)胞增殖能力的有效方法??寺⌒纬陕?=(克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù))×100%
判斷細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞狀態(tài),可以通過(guò)細(xì)胞活力的檢測(cè)來(lái)辨別,具體選擇哪種方法,根據(jù)實(shí)際需要而定。