細胞培養(yǎng)瓶是一種方形的細胞培養(yǎng)耗材,主要用于各種貼壁細胞的培養(yǎng)。貼壁細胞需要附著在支持物表面才能生長,由于其自身特性,在消化這類細胞的時候一般要借助蛋白水解酶。常用的兩種蛋白水解酶有兩種,分別是:胰蛋白酶和膠原酶。
1.胰蛋白酶(Trypsin)
胰蛋白酶是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷,不僅起消化酶的作用,而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體,起活化作用。
胰蛋白酶能直接作用在細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞外的黏附蛋白及胞外基質(zhì)上,但如果作用時間過長,細胞膜上內(nèi)嵌的其他蛋白也會被水解,導(dǎo)致細胞膜受損;不同細胞適合的胰蛋白酶使用濃度及作用時間都各有不同。
2.膠原酶(Collagenase)
為一種膠原水解酶,大多由細菌提取而來;能辨識并剪切Pro-X-Gly-Pro勝肽序列,而此序列在胞外基質(zhì)主成分-膠原蛋白中出現(xiàn)的頻率比一般蛋白高很多,使得膠原酶能較專一的作用在胞外基質(zhì)上。
所以對細胞的傷害比胰蛋白酶小,且在鈣、鎂離子環(huán)境中仍有活性,可用BSS(如D-hanks或者PBS)或含血清的培養(yǎng)液配制。操作簡便,但膠原酶價格相較于胰蛋白酶要高出許多,如果大量使用將增加實驗成本。
以上是細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)貼壁細胞時經(jīng)常用到的兩種蛋白水解酶,兩種酶各有特點,都可以用來消化細胞,但在使用時要根據(jù)各自的特點,控制好消化時間,避免消化過度,影響細胞后期生長。