在培養(yǎng)各種細(xì)胞時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)瓶是使用頻率比較高的一種細(xì)胞培養(yǎng)耗材,它多用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),規(guī)格從25ml-225ml不等。倉(cāng)鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)液會(huì)選用這種耗材,其培養(yǎng)的具體步驟如下:

T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶
1、細(xì)胞培養(yǎng)前期準(zhǔn)備工作:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗1%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

T225細(xì)胞培養(yǎng)瓶
2、細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

三角細(xì)胞搖瓶
3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
以上是在細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)倉(cāng)鼠腎細(xì)胞的具體步驟。此外,細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml。