細(xì)胞工廠是一種一層或多層結(jié)構(gòu)的細(xì)胞培養(yǎng)耗材,在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,我們需要及時(shí)掌握細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),才能進(jìn)行下一步的進(jìn)程操作。檢測(cè)活細(xì)胞數(shù)量可以采用臺(tái)盼藍(lán)染色法進(jìn)行,具體操作方法如下:
1. 對(duì)于貼壁細(xì)胞而言,吸出培養(yǎng)基,加入消化液,在孵箱中消化適宜時(shí)間。細(xì)胞變圓后,加入等量或大于消化液體積的培養(yǎng)基終止消化。離心后,用培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液;
2. 取0.5ml臺(tái)盼藍(lán)溶液、0.3mlPBS和0.2ml的細(xì)胞懸液,充分混勻。然后將混合液放置1-2min。用毛細(xì)吸管或10ul的小槍頭吸取少量混合液,注入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板;
3. 至少計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞,并計(jì)數(shù)其中的染色細(xì)胞數(shù)量;
4. 用超純水和75%乙醇清洗計(jì)數(shù)板和蓋玻片;
5. 正常細(xì)胞是不會(huì)被染上顏色的,只有細(xì)胞死亡后,細(xì)胞膜通透性變大,臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),細(xì)胞呈藍(lán)色?;旌弦翰荒芊胖锰L(zhǎng)時(shí)間,否則正常的活細(xì)胞也會(huì)攝取染料,影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性;
6. 細(xì)胞活力(%)=(總細(xì)胞數(shù)-著色細(xì)胞數(shù))/總細(xì)胞數(shù)*100;
7. 臺(tái)盼藍(lán)染色同細(xì)胞計(jì)數(shù)法一樣,誤差性較大,只能檢測(cè)早期細(xì)胞凋亡水平,不能明顯表現(xiàn)出對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的差異性。
在細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞的過程中,總有一些因?yàn)楦鞣N原因死亡的細(xì)胞,掌握活細(xì)胞數(shù)量及細(xì)胞活力,是細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中的關(guān)鍵操作,也是確保試驗(yàn)進(jìn)程的有效途徑。