我們?cè)谑褂?a href="http://www.qqccwx.cn/sbgc.html" target="_blank">細(xì)胞工廠(chǎng)等細(xì)胞培養(yǎng)耗材進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),如果出現(xiàn)細(xì)胞污染的情況下,我們這段時(shí)間的努力可能都會(huì)白費(fèi)。那我們?nèi)绾畏直孢@些污染的情況呢?今天富道細(xì)胞就跟大家分享一下。
細(xì)菌污染:肉眼可見(jiàn)細(xì)胞工廠(chǎng)底部有一層白色的薄膜,培養(yǎng)基渾濁變酸變黃呈云霧狀,鏡下觀(guān)察有自由行動(dòng)的顆粒,細(xì)胞狀態(tài)差、基本死亡、看不到正常細(xì)胞形態(tài)。在高倍鏡下看到的有可能是一些細(xì)胞狀態(tài)不好分泌的雜質(zhì),也有些是細(xì)胞凋亡后的碎片。通常凋亡細(xì)胞的裂解產(chǎn)物對(duì)正常細(xì)胞生長(zhǎng)是不利的(比如溶酶體的釋放),所以有的話(huà)建議通過(guò)換液的方式去掉。這些小黑點(diǎn)會(huì)有布朗運(yùn)動(dòng),看上去跟細(xì)菌一樣會(huì)動(dòng),區(qū)別在于細(xì)菌的形態(tài)是每個(gè)點(diǎn)都幾乎一樣,而且能看到某些黑點(diǎn)會(huì)向某一方向移動(dòng)較長(zhǎng)的距離(桿菌的話(huà)在高倍鏡下常有2根短桿狀的菌體黏在在相互扭動(dòng),有臭味),而碎片一般是在原地來(lái)回反復(fù)地振蕩,而且數(shù)量也不會(huì)增多。培養(yǎng)基是否渾濁和細(xì)菌密度有關(guān),污染初期數(shù)量不多是不渾濁的。
霉菌污染:培養(yǎng)液清亮,肉眼看到培養(yǎng)瓶有團(tuán)塊的霉菌斑/菌落,可見(jiàn)絮狀漂浮物,顯微鏡下看到霉菌的菌絲,呈細(xì)束纖維狀或較為密集的孢子團(tuán)塊,呈細(xì)絲竹節(jié)管狀;污染初期pH穩(wěn)定,嚴(yán)重后迅速升高。
酵母菌污染:肉眼看到培養(yǎng)瓶顏色變得渾濁,顯微鏡下看到小的酵母顆粒。(注:真菌通常傾向于聚集生長(zhǎng),在培養(yǎng)體系內(nèi)形成“毛茸茸”的菌落,或絲狀菌體,但一般不出現(xiàn)培養(yǎng)基變酸等現(xiàn)象。)
白色念珠菌:污染肉眼看到培養(yǎng)瓶顏色變得渾濁,顯微鏡下看到一串一串的白色念珠菌。
支原體污染:細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)的慢,量少時(shí)培養(yǎng)基不會(huì)渾濁,對(duì)細(xì)胞影響較小,但支原體增殖速度快,逐漸影響細(xì)胞生長(zhǎng),細(xì)胞邊緣不清晰,培養(yǎng)基逐漸渾濁。支原體在沒(méi)做特殊處理的情況下無(wú)法用普通光鏡觀(guān)察到,只能買(mǎi)個(gè)支原體檢測(cè)試劑盒定期檢測(cè)一下/支原體抑制劑處理、日常預(yù)防。
真菌污染:細(xì)胞培養(yǎng)基清亮不變色,鏡下可見(jiàn)毛毛的白色絲狀漂浮物,慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長(zhǎng)的比較慢,不像細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了,也很難救活了。