淋巴細(xì)胞是白細(xì)胞的一種,是體積非常小的白細(xì)胞。培養(yǎng)這種細(xì)胞前期一般要用到細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞搖瓶,如果淋巴細(xì)胞培養(yǎng)失敗,可能是以下原因:
1.污染是細(xì)胞培養(yǎng)失敗的主要原因,包括細(xì)菌和真菌。支原體污染不易發(fā)覺,但對細(xì)胞生長影響較小,尤其只培養(yǎng)72 小時。一般是分離過程中的用液和培養(yǎng)基出現(xiàn)了污染。
2.pH值過高或過低,或培養(yǎng)過程中細(xì)胞搖瓶的瓶塞不緊,CO2 逸出,導(dǎo)致pH值上升。
3.誘導(dǎo)劑 淋巴細(xì)胞在體內(nèi)外一般是不分裂的,在培養(yǎng)過程中須添加刀豆球蛋白(ConA) 、脂多糖(LPS) 、白細(xì)胞介素2 ( IL - 2) 、植物血凝素(PHA) 、絲裂霉素等促分裂劑和抗原物質(zhì)。須注意它們的濃度及是否失效。
4.培養(yǎng)器皿洗滌不干凈,有蠟、油污或酸殘留。
5.培養(yǎng)用液含有雜質(zhì),配制過程中所使用的各種溶液必須用三蒸水,若含有Fe 、Ca 等離子及雜質(zhì),可影響細(xì)胞的增殖。
6.接種的細(xì)胞數(shù)目過多或過少,或提取的淋巴細(xì)胞中混有大量紅細(xì)胞。
7.血清質(zhì)量不佳,影響淋巴細(xì)胞的生長。
綜合來看,如果細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞搖瓶培養(yǎng)淋巴細(xì)胞失敗,原因可能是多方面的,需要具體分析,找出原因,才能確保再次培養(yǎng)細(xì)胞時的成功率。
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