消化細胞是培養(yǎng)細胞過程中的一項基本操作,而胰蛋白酶則是消化細胞過程中用到的一種消化液。今天我們就詳細講一下胰蛋白酶。
胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 為蛋白酶的一種,EC 3.4.4.4,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動物中,作為消化酶而起作用。胰蛋白酶的作用是使細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。
胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關,在 pH 為 8.0 、溫度為 37℃ 時,胰酶溶液的作用能力最強。使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應選用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ,如: D-Hanks 液。終止消化時,可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。
在使用胰蛋白酶消化細胞的過程中藥注意避免消化液被細菌污染,一般消化時間約為1-3分鐘,肉眼觀察細胞培養(yǎng)瓶瓶底由半透明轉(zhuǎn)為透明、點狀時,棄去細胞消化液,或看見培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可。
上一篇: 細胞搖瓶的兩種蓋子介紹
下一篇: 細胞工廠為什么要無菌環(huán)境