細胞培養(yǎng)瓶在貼壁細胞培養(yǎng)時應(yīng)用較多,當細胞密度達到一定程度時,我們就需要進行細胞的傳代操作。而由于貼壁細胞是貼附在瓶底生長的,這個時候就需要用到消化酶,膠原酶是常用的一種。
膠原酶的化學名為膠原蛋白水解酶(Collagenase),它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu),而不損傷其它蛋白質(zhì)和組織。膠原酶的化學本質(zhì)是一種蛋白質(zhì),因此,它對溫度、PH和導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性的各種因素均非常敏感,非常易受到外界條件的影響而改變其本身的構(gòu)象和性質(zhì)。
膠原酶是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的,主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬,內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時,用胰蛋白酶解離細胞的效果較差,這時可采用膠原酶解離細胞法。膠原酶僅對細胞間質(zhì)有消化作用而對上皮細胞影響不大。
因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織,可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞專用膠原酶,要根據(jù)細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的細胞類型選擇膠原酶類型。
以上是關(guān)鍵膠原酶的相關(guān)信息及適用的細胞類型,此外,消化細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的細胞還會用到胰蛋白酶,這也是使用率比較高的一種酶。
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