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在利用細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞被污染是非常普遍的問題。相對(duì)于其他污染，支原體污染細(xì)胞后培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，所以我們很難通過肉眼判斷。判斷細(xì)胞是否受到來自支原體污染，可以通過以下四種方法：

1、DNA熒光染色法

DNA熒光染色法是利用熒光染色劑雙苯咪唑Hoechst33258能夠結(jié)合支原體DNA中的A-T堿基富集區(qū)域的原理，被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后，其細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光點(diǎn)，即是富含A-T堿基區(qū)域的支原體DNA。

2、PCR技術(shù)

根據(jù)支原體基因組內(nèi)的保守序列設(shè)計(jì)特異引物，對(duì)待檢樣品的核酸進(jìn)行擴(kuò)增，通過對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。PCR檢測技術(shù)用于支原體污染的檢測，周期短、靈敏度高、特異性好、操作簡單且一次可檢測大量樣品。

3、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

ELISA用于支原體污染的檢測中，有著良好的特異性和敏感性，一次可以完成大量樣品的檢測。具有簡便、快速與定量定性檢測等特點(diǎn)。

4、電鏡

一般細(xì)胞工廠中的細(xì)胞培養(yǎng)48～72小時(shí)，細(xì)胞接近匯合前，用胰酶消化細(xì)胞制成細(xì)胞懸液后進(jìn)行固定、包埋、切片后才能進(jìn)行觀察。

以上是如何判斷細(xì)胞工廠中細(xì)胞發(fā)生污染常用的四種檢測方式。目前已知能污染細(xì)胞的支原體有20種以上，其中95%以上都是口腔支原體，所以操作人員在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)要注意無菌操作。