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細(xì)胞復(fù)蘇和凍存講究“慢凍快溶”，復(fù)蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細(xì)胞凍存液快速融化至37℃，使胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。

準(zhǔn)備好我們的離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、移液管、準(zhǔn)備開始復(fù)蘇準(zhǔn)備

●打開水浴鍋加熱至37℃。

● 超凈臺上放好離心管（離心管規(guī)格選用15ml的），細(xì)胞培養(yǎng)瓶，移液管，紫外滅菌至少20至30分鐘，吹風(fēng)5至10分鐘除去臭氧。

● 37℃預(yù)熱好要復(fù)蘇細(xì)胞的培養(yǎng)液，也可以不用預(yù)熱培養(yǎng)液，根據(jù)細(xì)胞情況選擇。

●向離心管中加約5至10ml培養(yǎng)液，從液氮罐或-80℃中取出凍存細(xì)胞，立即將凍存管放入37℃水浴中并輕輕搖動，待融化后（約2min即可）立即將解凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含培養(yǎng)液的離心管中，800-1000rpm下離心5min，棄上清，加適量完全培養(yǎng)液輕輕吹打重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，輕晃使瓶底液體分散均勻，標(biāo)好細(xì)胞名稱、代數(shù)、復(fù)蘇日期，顯微鏡下觀察后放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中。一般貼壁細(xì)胞過夜即可貼壁，換液和傳代時間根據(jù)不同細(xì)胞生長情況而定。

細(xì)胞復(fù)蘇注意事項

復(fù)蘇時動作要快，盡量減少胞內(nèi)形成冰晶，影響復(fù)蘇后細(xì)胞活率。

1. 融化時盡量不要碰到管口，以免容易造成污染。

2.若一次性需要復(fù)蘇細(xì)胞很多，可以分批水浴解凍，防止傳熱不佳使得細(xì)胞融化時間延長。

3.若需要同時復(fù)蘇好幾種細(xì)胞，提前在離心管和培養(yǎng)瓶上做好標(biāo)記，或記住自己擺放的位置，不要弄混亂。