細(xì)胞搖瓶是培養(yǎng)懸浮細(xì)胞常用的一種細(xì)胞培養(yǎng)耗材,不同于貼壁細(xì)胞,懸浮細(xì)胞不依賴于支持物表面,在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長。在細(xì)胞傳代前首先要消化細(xì)胞,那么,如何消化懸浮細(xì)胞呢?
從懸浮細(xì)胞的定義上來說,懸浮細(xì)胞是不貼壁的,所以它不需要酶的作用就可以使其從細(xì)胞搖瓶表面脫離。一般實(shí)驗(yàn)室中常用直接傳代法和離心傳代法(在發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞碎片的情況下)來處理懸浮細(xì)胞,當(dāng)我們觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長滿至 80%~90%(細(xì)胞懸液變黃)的時(shí)候,細(xì)胞就可以進(jìn)行傳代操作了。
從顯微鏡下觀察,如果沒有細(xì)胞碎片、細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,就可以選擇直接傳代法。將原瓶中的培養(yǎng)基按比例分裝到新的培養(yǎng)瓶中,然后補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基,然后隔天觀察細(xì)胞密度來考慮是否需要補(bǔ)液。如果從顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)較差時(shí),則需要使用離心傳代法,首先,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),1000rpm 離心 5 min;然后棄去上層清液,輕輕地將細(xì)胞沉淀彈散,使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞;用吸管吸取適量細(xì)胞懸液,裝入新的培養(yǎng)瓶,再加入適量的新鮮培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。