細胞毒性是由細胞或化學物質(zhì)引起的單純細胞殺傷事件,不依賴于凋亡或壞死的細胞死亡機理。通過這個試驗可以判斷細胞工廠原料中是否含有不利于細胞生長的物質(zhì)。
細胞毒性是化學物質(zhì)(藥物)作用于細胞基本結(jié)構(gòu)和/或生理過程,如細胞膜或細胞骨架結(jié)構(gòu),細胞的新陳代謝過程,細胞組分或產(chǎn)物的合成、降解或釋放,離子調(diào)控及細胞分裂等過程,導致細胞存活、增殖和/或功能的紊亂,所引發(fā)的不良反應。一般檢測細胞工廠是否具有細胞毒性可以通過以下方法進行:
1、MTT、XTT法:利用線粒體內(nèi)部酶的活性,可以將特定的四唑鹽類進行轉(zhuǎn)化,然后通過酶標儀進行檢測;
2、LDH的方法:通過檢測細胞培養(yǎng)上清中LDH的酶活性,來檢測細胞毒性;
3、其它酶方法:如檢測上清中堿性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等;
4、細胞增殖能力分析試劑盒:正常細胞代謝旺盛,其線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶,可將四唑鹽類物質(zhì)(如 MTT、XTT、WST-1等 )還原為紫色的結(jié)晶狀的物質(zhì),沉積在細胞周圍,然后通過酶標儀讀取OD值,從而檢測到細胞增值狀態(tài)。
5、熒光素發(fā)光法細胞生存能力檢測:腺苷酸激酶(AK)存在于所有真核和原核細胞的胞漿中,AK具有激活ADP生成ATP。當細胞受損后,細胞膜發(fā)生破損,AK會釋放到培養(yǎng)上清中。試劑盒利用熒光素酶和熒光素在ATP作用下可以發(fā)光,通過化學發(fā)光儀可以定量進行檢測。