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細(xì)胞搖瓶在搖瓶種子制備中的應(yīng)用
發(fā)表日期:2022-02-09

搖瓶種子是指將斜面種子或米孢子接種入裝在細(xì)胞搖瓶(又稱“三角搖瓶”)內(nèi)的液體營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中,在搖床上振蕩培養(yǎng)得到的液體種子。搖瓶種子制備流程如下:

125ml三角細(xì)胞搖瓶

125ml三角細(xì)胞搖瓶

1、培養(yǎng)基配制

搖瓶種子以培養(yǎng)具有強(qiáng)生長(zhǎng)活性的營(yíng)養(yǎng)菌體為目的,因而在配制培養(yǎng)基時(shí)必須全面、均衡地滿足菌體生長(zhǎng)對(duì)各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求,包括碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等。搖瓶種子在培養(yǎng)過(guò)程中不便于調(diào)節(jié)PH,因此在選擇培養(yǎng)基時(shí)要考慮培養(yǎng)過(guò)程中PH的穩(wěn)定,可以通過(guò)生理酸、堿性物質(zhì)的平衡搭配及加入磷酸鹽、碳酸鈣之類緩沖劑來(lái)實(shí)現(xiàn)。

500ml三角細(xì)胞搖瓶

500ml三角細(xì)胞搖瓶

2、接種

搖瓶種子的接種一般采用斜面種子挖塊法或米孢子粒計(jì)數(shù)接入法。這種接種方式難于掌握一致的接種量,可能會(huì)影響種子質(zhì)量的穩(wěn)定。對(duì)接種量敏感的菌種,盡量采用懸液接種法,即用無(wú)菌蒸餾水將斜面種子或米孢子粒上的細(xì)胞或孢子洗下,制成細(xì)胞或孢子懸液,然后按一定體積或一定細(xì)胞數(shù)接種至搖瓶種子培養(yǎng)基中。

2L細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶

2L細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶

3、培養(yǎng)

在恒溫室內(nèi)的搖床上進(jìn)行培養(yǎng),一般選用旋轉(zhuǎn)式搖床,這樣更利于培養(yǎng)時(shí)氣體交換。為了使細(xì)胞搖瓶中的水分蒸發(fā)量保持穩(wěn)定,恒溫室也應(yīng)控制好濕度。

以上是搖瓶種子的制備過(guò)程,細(xì)胞搖瓶是制備過(guò)程中的必備耗材。制備好的種子應(yīng)當(dāng)在培養(yǎng)成熟后立即使用。如果暫時(shí)不用,可以放在4℃冰箱中保存,保存期盡量不要超過(guò)3天。
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