霉菌污染是科研人員在細胞培養(yǎng)實驗中非常擔心的情況之一,常常導致項目延期、損失稀缺的細胞等后果。那么應該如何處理細胞工廠中的霉菌污染,降低損失呢?
判斷污染:真菌的種類非常多,對細胞造成污染的多是曲霉菌、白色念珠菌、酵母菌、黑霉菌、孢子菌等。霉菌污染后往往會在培養(yǎng)液中形成淡黃色或是白色的漂浮物,肉眼可見,很容易被發(fā)現(xiàn),短期內培養(yǎng)液一般不變混濁。倒置顯微鏡下可以看見細胞之間有縱橫交錯穿行的絲狀,樹枝狀或管狀菌絲,并漂浮在培養(yǎng)液中。很多菌絲在高倍鏡下可以看見鏈狀排列的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圓形,散在細胞上及細胞周邊生長。有時通過顯微鏡可能會發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)瓶外壁生長的菌絲,較易誤認為污染。發(fā)現(xiàn)瓶外的菌絲后應及時用酒精擦拭干凈。
處理污染:首先,需要確定細胞工廠中的污染物是否是霉菌污染,如確認是霉菌污染,盡快把污染細胞與其它細胞系隔離開,同時需要對實驗過程中所用的器材和試劑做處理。一般來說,高濃度的抗生素和抗霉菌素都可能對細胞或細胞系有毒性作用,因此,通過劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平,在使用抗生素如兩性霉素 B 和抗霉菌素如泰樂菌素時尤為重要。
T75細胞培養(yǎng)瓶
綜上所述,處理細胞工廠中的霉菌污染可以按照以上方法進行。此外,在細胞培養(yǎng)實驗中,要嚴格執(zhí)行無菌操作,減少各種污染。