細(xì)胞培養(yǎng)瓶是貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)常用的一類細(xì)胞培養(yǎng)耗材,貼壁細(xì)胞不同于懸浮細(xì)胞,需要貼在支持物表面才能生長。貼壁的效果直接影響細(xì)胞的生長情況,通過以下方法可以提高細(xì)胞的貼壁效果:
1、適度消化細(xì)胞:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。
2、盡量用塑料材質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng),這樣的瓶子經(jīng)過TC表面處理后,可以大大提高瓶子的貼壁性能,讓細(xì)胞更好的貼附在上面。
3、復(fù)蘇新的細(xì)胞,第一周用20%血清幫助細(xì)胞復(fù)原。
血清培養(yǎng)基瓶1000ml
4、使用合適的細(xì)胞外基質(zhì)或貼壁試劑,幫助細(xì)胞更好貼壁。
5、細(xì)胞傳代24小時(shí)之內(nèi),盡量不要晃動(dòng),以免影響細(xì)胞貼壁效果。
6、體內(nèi)上皮細(xì)胞生長在膠原構(gòu)成的基膜上,因此培養(yǎng)在有膠原的底物上有利于生長。人或小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng),可以用γ射線照射后的3T3細(xì)胞為飼養(yǎng)層,另外降低pH、Ca2+含量和溫度,均有利于上皮細(xì)胞生長。
提高細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞的貼壁效果,可以通過以上幾種方式。此外,在傳代接種時(shí)一定要鋪均勻,避免細(xì)胞抱團(tuán)生長。