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細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究最常用的手段之一，分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩大類。原代培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)，是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的首次培養(yǎng)，適于做細(xì)胞形態(tài)、功能和分化等研究。

懸浮細(xì)胞培養(yǎng)搖瓶

細(xì)胞培養(yǎng)要遵循嚴(yán)格的步驟，任何一步的忽視都有可能導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗，原代細(xì)胞培養(yǎng)具體步驟如下：

細(xì)胞工廠

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30-60分鐘。

4、剪切：用眼科剪把組織切成2-3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30-50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨谩Ｏ瘯r(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。

T225細(xì)胞培養(yǎng)瓶

原代細(xì)胞培養(yǎng)是成功傳代之前的培養(yǎng)，是建立各種細(xì)胞系（株）必經(jīng)的階段。假如原代培養(yǎng)能夠維持幾小時(shí)甚至更長，即可進(jìn)行進(jìn)一步篩選。