細(xì)胞培養(yǎng)瓶是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中經(jīng)常用到的一種細(xì)胞耗材,在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),各種污染經(jīng)常給實(shí)驗(yàn)造成各種困擾,阻礙實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。那么如何處理好這些污染呢?
細(xì)胞污染
細(xì)胞污染一般是由無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)、器皿試劑滅菌不徹底、手或器械從打開的器皿口上方經(jīng)過(guò)等原因造成的。細(xì)胞一旦被污染,多數(shù)是很難挽回的,以下是細(xì)胞污染常見(jiàn)的幾種類型及處理方法:
T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶
- 細(xì)菌污染:細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯,細(xì)胞大多在24小時(shí)死亡??稍谂囵B(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理,如四環(huán)素、慶大霉素等,如果細(xì)胞不是特別珍貴,建議棄用。
- 霉菌污染:因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液是清亮的,所以霉菌污染非常難以早期發(fā)現(xiàn),等發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已經(jīng)為時(shí)過(guò)晚了。細(xì)胞一旦被霉菌污染,很難挽救,兩性霉素B或制霉菌素都于事無(wú)補(bǔ),建議果斷舍棄該污染細(xì)胞,將環(huán)境徹底消毒。
- 黑膠蟲污染:黑膠蟲是納米級(jí)的細(xì)菌,低倍下為黑色點(diǎn)狀,高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲游來(lái)游去。培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會(huì)太影響。但是如果太多了,也會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果??梢酝ㄟ^(guò)增加細(xì)胞接種密度的方式,提高細(xì)胞生存率。
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支原體污染:支原體在倒置顯微鏡下不可見(jiàn)。早期污染,培養(yǎng)液也不渾濁。支原體污染后,可影響所有的細(xì)胞生長(zhǎng)參數(shù)。如發(fā)現(xiàn)這種污染建議扔掉細(xì)胞,重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
以上是細(xì)胞培養(yǎng)瓶常見(jiàn)的幾種污染及處理辦法,細(xì)胞污染要以預(yù)防為主,做好培養(yǎng)間,器皿和培養(yǎng)液的消毒滅菌工作。在操作的時(shí)候,嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作規(guī)范。