貼壁細(xì)胞是目前細(xì)胞培養(yǎng)中的主要類型，它們需要吸附在支持物表面，依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長、繁殖。有時候我們會發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)方瓶中的細(xì)胞無法貼壁，這是什么原因引起的呢？
細(xì)胞貼壁是適應(yīng)環(huán)境的一種反應(yīng)，密度大于培養(yǎng)基的細(xì)胞會沉降在底面上，如果細(xì)胞要生存必定得改善這個環(huán)境，分泌細(xì)胞外基質(zhì)，改善底面結(jié)構(gòu)，然后很自然就貼附在底面上了。密度小于水的細(xì)胞會漂浮在液面上，所以不可能貼在底面上，但是如果將培養(yǎng)液加滿，使細(xì)胞能夠與細(xì)胞培養(yǎng)方瓶上面的壁接觸同樣可以貼壁。如果細(xì)胞出現(xiàn)不貼壁的情況，可以從以下幾個方面分析：
1、細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時間：消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的；若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷，使細(xì)胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。
2、缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細(xì)胞的貼壁效果會下降很多。
3、支原體或細(xì)菌的污染。
4、培養(yǎng)液配置、儲存不當(dāng)，如pH值過堿，Gln量太少等原因。
5、復(fù)蘇的細(xì)胞本身狀態(tài)不好，已經(jīng)老化，失去貼附性。
6、接種細(xì)胞數(shù)目太少，無法分泌足夠的細(xì)胞外基質(zhì)。
7、復(fù)蘇時處理速度太慢，復(fù)蘇過程不當(dāng)。
綜合來看，貼壁細(xì)胞出現(xiàn)不貼壁現(xiàn)象主要是以上幾個方面的原因。此外，塑料材質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)方瓶如果未經(jīng)過表面TC處理，也會影響細(xì)胞的貼壁性能。
